एसिड फास्ट स्टेनिंग क्या है ? जाने। What is acid fast staining ? Know.

acid fast stain को Ziehl Neelsen (ZN),AFB stain, gram stain भी कहते है। mycobacterium tuberculosis bacteria को हम खुली आँखो से नहीं देख पाते है इसलिए इन्हे स्टेनिंग कर मइक्रोस्कोप के द्वारा देखा जाता है। कुछ मइक्रोऑर्गेनिस्म को simple staining से देखा जा सकता है और कुछ मइक्रोऑर्गेनिस्म को special staining के द्वारा देखा जाता है क्योकि ऐसे मइक्रोऑर्गेनिस्म के सर्फेस पर waxy covering की सेल वाल होती है। इस technique को diffrential staining technique या ZN भी कहा जाता है। इस technique  की  PAUL EHRLICH  वैज्ञानिक ने 1883 में  खोज़ की थी।

Requirments :

grease slide, dimond mark, brumstick, immersion oil, lamp, microscop, glass rod, sputum specimen,

Reagents : -  1% carbol fuchsin,    25% H2SO4 ,     0.1% methylene blue.  

Acide fast staining method : -

सबसे पहले एक साफ और क्लीन कांच की slide  लेते है slide  पर dimond मार्क से slide नंबर डालेंगे slide पर स्पॉट या मॉर्निंग म्यूकस स्पुटम की एक 2:3 की circul स्मीयर ब्रूम स्टिक की सहायता से बनाते है और उसे dry होने के लिए कुछ समय के लिए रख देते है उसके बाद slide को heat fix करने के लिए 2 से 3 बार हीट फ्लैम में से पास करते है। और carbol fuchsin 4 मिनट के लिए डालेंगे। 4 मिनट के बाद सल्फ्यूरिक एसिड से वॉश करेंगे। सल्फ्यूरिक एसिड से वॉश करने के बाद methylene blue 2 मिनट के लिए डालेंगे और 2 मिनट के बाद normal वाटर से वॉश कर लेगे । slide को dry होने के लिए कुछ समय के लिए रख देते है।

Stained slide objervation:

stained slide को माइक्रोस्कोप  में immersion oil की सहायता नीचे दी गई ग्रेडिंग चार्ट के अनुसार फील्ड देखते है। slide की फील्ड में यदि acid fast bacilli उपस्थित होते है तो वे रोडशेप पींक कलर के दिखाई देते है।

examination	Result	Grading	No. of field to be examined
More than 10 AFB per oil immersion fields	positive	3+	20
1-10 AFB per oil immersion fields	positive	2+	50
10-99 AFB per oil immersion fields	positive	1+	100
1-9 AFB per 100 oil immersion fields	scanty	Record exact number seen	100
No AFB per 100 oil immersion fields	negative	0	100

grading chart of AFB